万能的HTRF：测量清新血液样本中细胞因子的开释

导读

药物免疫毒性不错界说为非预期的免疫约束或免疫改革。免疫约束可能导致宿主对传染源或肿瘤细胞的违抗力下落，而免疫增强可能会加重自己免疫性疾病或过敏反映。药物请示的全身免疫激活可导致与细胞因子过度开释赓续的严重反映，也称为细胞因子风暴。由于免疫系统的功能具有高度的物种特异性，因此很难通过动物究诘来预计东说念主类细胞因子的开释。全血检测在药物开中属于易于操作的体外治理有野心。能快速省略地监测东说念主类细胞因子开释，从而预计药物的功效和安全性。比较基于PBMC的测定更科学、更浅陋，不需要纯化和区分细胞。少许血液（<5mL）足以测试多种施行条款。

究诘实质

这项究诘招揽免疫道路和赓续抖擞剂来靶向Toll样受体道路、STING道路或TCR激活道路。临了通过HTRF定量东说念主IL1β、IL2、IL6、IL8、TNFα和IFNγ。此外，将HTRF数据与ELISA参覆按剂盒赢得的数据进行比较，以评估两种时候之间的赓续性。

来自3位不同献血者的清新血液被网络在肝素管中，何况全血样品均质化后在RPMI中稀释。将化合物分拨到96孔板中，然后添加预稀释的全血样品。在37°C下孵育过夜，网络上清液，按表1所示稀释全血上清液。临了使用HTRF或ELISA测量细胞因子。

表1：施行条款：U:未处理；H:HKLM；L:脂多糖；Z:酵母聚糖；R:R848；C:cGAMP；PI:PMA/离子霉素；PHA:植物血凝素；O/C:Okt3/抗CD28抗体

施行恶果

01 Toll样1、2、4、6受体的激活

用HKLM、LPS或酵母聚糖刺激Toll样受体道路。下图流露了未处理样品与处理样品中每种测量细胞因子的浓度。HTRF治理有野心粗略测定总计样品中的基础细胞因子水平（虚线）以及测量细胞因子分泌的加多。

02 STING通路的激活和T细胞受体道路的激活

2,3cGAMP是STING道路的特异性激活剂。激活后的细胞因子分泌谱流露TNFα、IL1β和IL6明显加多。相背，IFNα、IL2或IL8莫得明显反映（下图）。图6流露OKT3/抗CD28刺激全血中的T细胞请示隐微的IFNγ开释，但未能请示任何IL2产生。赓续词，对照条款PHA或PMA/离子霉素请示IL2和IFNγ细胞因子的激烈加多。这些数据标明OKT3/CD28并莫得产生激烈T细胞特异性反映。

03 HTRF和ELISA检测之间的赓续性

由于ELISA面目仍然是生物体液中细胞因子测量的传统常用面目，因此本究诘将HTRF赢得的细胞因子浓度与ELISA测定赢得的细胞因子浓度进行比较。来自3个不同供体的全血样本领先在地塞米松存在/不存在的情况下用R848（TLR 7/8激活）进行刺激。通过HTRF或ELISA进行R848+/-地塞米松处理后IL8开释的测量，并笃信两种化合物的EC50或IC50。下图流露了HTRF和ELISA东说念主IL8测定之间在164个样品上赢得的赓续性。在这里，究诘讲明了两种检测之间具有终点好的赓续性，赓续值r=0.993，比例偏差为0.77。

然后究诘比较了通过HTRF和ELISA在3个不同供体上赢得的R848和地塞米松药理剂量反映（下图）。恶果标明，两种面目测得的R848的EC50值或地塞米松的IC50值也终点接近（见表2）。

跟着免疫肿瘤学或代谢疾病等领域的究诘和药物发现的快速发展，监测免疫系统对治愈的反映比以往任何时分王人愈加迫切。全血检测是一种用于评估对治愈免疫反映省略而浩大的体外器具。HTRF细胞因子检测具有专有的免洗有野心、低样品挥霍和粗犷的动态范围，与ELISA比较，不错加多测试化合物的数目，并快速赢得全血中细胞因子分泌的数据，为在生理环境中测试化合物创造了理思的面目平台。